抗IL-4全人源单链抗体的筛选和鉴定

摘要：

目的 表达人白细胞介素4(IL-4),从全人源单链抗体(scFv)文库中筛选抗IL-4全人源scFv并鉴定其特异性.方法 采用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导pET102/IL-4/BL21表达IL-4,进行纯化鉴定.利用全人源噬菌体抗体文库表达抗IL-4全人源scFv,用表达的IL-4作为抗原,筛选阳性克隆菌株经PCR、酶切及测序鉴定.采用斑点杂交检测抗IL-4scFv的特异性.结果 表达的IL-4融合蛋白相对分子质量(Mr)为27 000.采用该抗原筛选出了表达抗IL-4的阳性克隆,PCR结果显示,在约1000bp处有扩增的目的条带.酶切结果显示,有2株克隆的指纹图谱相同,其余均不同.选取指纹图谱不同的且与IL-4结合能力强的4个scFv的克隆进行测序,显示有3个的序列正确.斑点杂交显示,这3株克隆表达的scFv均具有特异性.结论 成功筛选到抗IL-4全人源scFv.

关键词：白细胞介素4(IL-4)、全人源单链抗体、筛选、鉴定

所属期刊栏目：31

分类号：R392.11;R786

资助基金：四川省青年基金2012JQ0018;四川省卫生厅项目130259;泸州市科技局项目2012-177

在线出版日期：2016-01-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1698-1701