结核分枝杆菌脂蛋白G在HEK293T细胞中的表达及纯化

摘要：

目的 构建含结核分枝杆菌(MTB)脂蛋白G(LprG)基因的真核表达载体pcDNA3.1-His-LprG-FLAG,并在HEK293T细胞中表达和纯化LprG融合蛋白.方法 以MTB H37Rv基因组DNA为模板,用PCR法扩增LprG基因,并通过DNA重组构建真核表达载体pcDNA3.1-His-LprG-FLAG,酶切鉴定并测序.将重组质粒转染HEK293T细胞后,应用Western blot法检测His-LprG-FLAG融合蛋白的表达.利用Ni-NTA金属亲和层析柱从细胞上清和细胞裂解液中纯化融合蛋白His-LprG-FLAG,并用SDS-PAGE和Western blot法检测纯化后的蛋白.结果 成功构建了pcDNA3.1-His-LprG-FLAG的真核表达载体,Western blot 结果表明转染质粒后,HEK293T细胞裂解液中检测到目的蛋白,相对分子量(Mr)为27 000.经Ni-NTA金属亲和层析柱纯化后得到高纯度的融合蛋白His-LprG-FLAG.结论 成功构建并在HEK293T细胞中表达和纯化了His-LprG-FLAG融合蛋白.

关键词：结核分枝杆菌、脂蛋白G、基因克隆、真核表达、纯化

所属期刊栏目：31

分类号：R378.91;R392-33;Q786(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金81371775

在线出版日期：2016-01-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1624-1628