2型登革病毒非结构蛋白NS3的表达及其相互作用蛋白的纯化

摘要：

目的 构建2型登革病毒(DENV2)非结构蛋白3(NS3)与亲和标签融合蛋白的表达质粒,串联亲和纯化(TAP)法获得与NS3相互作用的蛋白.方法 根据DENV2基因序列,设计引物;以DENV2 cDNA为模板,PCR扩增出NS3基因,经酶切后克隆至含有串联亲和标签(FLAG-StrepⅡ)的哺乳真核表达载体pCI-SF,获得重组表达质粒pCI-NS3-SF;将上述重组质粒通过转染试剂LipofectamineTM 2000瞬时转染进入HEK293T细胞,Westem blot法验证NS3融合蛋白的表达;通过TAP法分离纯化与NS3相互作用的蛋白.结果 成功构建了NS3融合蛋白表达载体,利用TIAP系统分离得到与NS3蛋白相互作用的宿主蛋白.结论 串联亲和纯化法可以有效的分离与DENV2 NS3相互作用的细胞蛋白.

关键词：登革病毒、NS3、串联亲和纯化

所属期刊栏目：31

分类号：R392-33;R373.3

资助基金：国家自然科学基金31370193

在线出版日期：2016-01-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1588-1592