果蝇再生蛋白(rgn)多克隆抗体的制备及鉴定

摘要：

目的 制备具有高度特异性的抗果蝇再生蛋白(rgn)的多克隆抗体.方法 利用PCR技术从果蝇W1118 cDNA中获得rgn基因片段,构建重组质粒;将其转入JM109(DE3)菌株中诱导rgn融合蛋白表达,再利用Ni-NTA superflow层析柱法将其纯化;经Western blot法检测后,利用制备的抗原免疫SD大鼠,从血清中获得高纯度的抗rgn多克隆抗体,利用Western blot法和免疫组织化学染色法对抗体特异性进行鉴定.结果 构建的pRSETA-rgn表达载体成功表达6×His-rgn蛋白,融合蛋白在大肠杆菌中大量表达并纯化后,作为抗原免疫SD大鼠,获得了抗rgn的多克隆抗体;免疫组织化学染色技术证实rgn定位在果蝇三龄幼虫血细胞的细胞质.结论 成功获得了特异性较高的大鼠抗rgn多克隆抗体.

关键词：rgn蛋白、基因克隆、原核表达、多克隆抗体

所属期刊栏目：31

分类号：Q969.462.2;R392.11;R392-33(昆虫学)

资助基金：国家自然科学基金31270923

在线出版日期：2015-11-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1404-1407,1412