过表达人细胞S期激酶相关蛋白2(Skp2)促进MCF-7乳腺癌细胞生长及S期细胞增加

摘要：

目的 构建带FLAG标签的细胞S期激酶相关蛋白2(Skp2)基因真核表达载体pcDNA3-FLAG-Skp2并检测其对MCF-7乳腺癌细胞生长及细胞周期的影响.方法 采用反转录PCR从MDA-MB-231乳腺癌细胞中扩增Skp2基因,构建重组真核表达载体pcDNA3-FLAG-Skp2.酶切及测序鉴定重组质粒正确后,脂质体介导转染至MCF-7乳腺癌细胞中.采用Western blot法检测FLAG-Skp2的表达,Alamar blue比色法绘制细胞生长曲线,流式细胞术检测细胞周期.结果 PCR扩增片段与预期片段大小相符,测序结果与GenBank结果一致.Western blot结果显示质粒转染48 h后,细胞成功表达融合蛋白FLAG-Skp2.过表达Skp2的MCF-7乳腺癌细胞较对照组生长速度明显加快,S期细胞显著增多.结论 成功构建人Skp2真核表达载体pcDNA3-FLAG-Skp2.过表达Skp2的MCF-7细胞生长加快,S期细胞增多.

关键词：S期激酶相关蛋白2 (Skp2)、真核表达载体、MCF-7细胞、细胞周期

所属期刊栏目：31

分类号：R730.54;R392-33;Q279(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金81402506

在线出版日期：2015-11-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1306-1310