稳定表达RFP-GFP-LC3的RAW264.7细胞株的建立
目的 建立能够稳定表达红色荧光蛋白-绿色荧光蛋白-微管相关蛋白轻链3(RFP-GFP-LC3)的小鼠RAW264.7巨噬细胞.方法 构建含RFP-GFP-LC3基因的慢病毒重组质粒载体,将重组质粒与慢病毒包装质粒共转染HEK293T细胞,收集病毒上清后感染RAW264.7细胞.经嘌呤霉素筛选获得稳定表达RFP-GFP-LC3的RAW264.7细胞株,用荧光显微镜和流式细胞术分析感染效率.饥饿处理稳定感染细胞,荧光显微镜下观察RFP-GFP-LC3斑点.结果 成功构建了慢病毒pLV-CMV-RFP-GFP-LC3,经感染和嘌呤霉素筛选获得稳定表达RFP-GFP-LC3的RFP-GFP-LC3-RAW264.7细胞;荧光显微镜和流式细胞术显示RFP和GFP荧光率均达到100％,饥饿处理后自噬斑点显著增多.结论 成功建立稳定表达RFP-GFP-LC3的RAW264.7细胞株,为自噬研究建立了可靠细胞平台.
自噬、慢病毒、RAW264.7细胞、稳定表达
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R392.12;Q344+.13;R329.2+5
国家自然科学基金81302524,81202294,81172778;安徽省自然科学基金1208085QH162,KJ2013A105;大学生创新创业训练计划项目201310361096,AH201310361188,AH201310361189;安徽理工大学大学生科研项目2013-2014年
2015-08-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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