Ser176/180磷酸化位点突变的IKKα真核表达载体的构建及鉴定

摘要：

目的 构建Ser176/180磷酸化位点突变的核因子κB抑制剂激酶α(IKKα)真核表达载体.方法 通过PCR获得带有IKKα Ser176/180突变位点和无义突变KpnⅠ位点的片段,以及带有无义突变KpnⅠ位点的片段,两片段分别经过HindⅢ/Kpn Ⅰ以及Kpn Ⅰ/EcoR Ⅰ双酶切,载体pEGFP经HindⅢ/EcoR Ⅰ双酶切后连接.共聚焦显微镜技术观察激活型/死型pEGFP-IKKα KA/KD融合蛋白在真核细胞中的定位及其对P65核质易位的影响.Western blot法检测重组蛋白表达.结果 测序显示载体构建成功.pEGFP-IKKα KA分布在细胞核和细胞质,并能使P65发生核穿梭.pEGFP-IKKα KD主要分布在细胞质,不能使P65发生核质易位.Western blot结果显示出融合蛋白的特异性条带.结论 成功构建IKKα磷酸化位点激活型及死型的真核表达载体,在真核细胞中可有效表达.pEGFP-IKKα KA/KD在真核细胞中蛋白表达呈现不同定位,对下游P65的核质穿梭调控发挥不同效应.

关键词：核因子κB抑制剂激酶α、激酶突变型、真核表达载体

所属期刊栏目：31

分类号：R392-33;Q782;R34

资助基金：辽宁省自然科学基金20092123;辽宁省教育厅高校科研计划2009S108

在线出版日期：2015-08-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1162-1166