人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的原核表达和活性鉴定
目的 对入源中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)进行原核表达、纯化,并验证其免疫学活性.方法 通过化学合成法合成人源NGAL成熟肽cDNA序列,构建原核表达载体pCold-NGAL,转化至E.coli BL21(DE3) plysS中.摸索pCold-NGAL最佳诱导条件,表达并纯化重组蛋白;使用SDS-PAGE、Western blot法和免疫比浊法鉴定纯化后的重组NGAL蛋白的相对分子质量(Mr)和以及与NGAL单克隆抗体(mAb)的结合活性.结果 经双酶切和测序验证,原核表达载体pCold-NGAL成功构建.优化诱导条件后,重组NGAL蛋白在E.coli BL21(DE3) plysS中以可溶性蛋白形式表达,Mr约为25 000.通过Ni2+亲和层析纯化获得高纯度重组NGAL蛋白,SDS-PAGE分析其纯度高于98.0％.经Western blot法和免疫比浊法鉴定,重组NGAL蛋白可与NGALmAb特异性结合.结论 成功表达和纯化了重组NGAL蛋白,并具有免疫学活性.
中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白、脂质运载蛋白2、原核表达
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R392.11;Q786
国家高技术研究发展计划8632011AA02A103;广东省战略新兴产业核心技术攻关项目2012A080800007
2015-06-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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