肿瘤相关抗原胰岛素样生长因子2mRNA结合蛋白3多克隆抗体的制备和鉴定
目的 构建胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白3(IGF2 BP3)的原核表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化IGF2BP3-His融合蛋白,制备和鉴定小鼠抗人IGF2BP3多克隆抗体.方法 用PCR方法扩增IGF2BP3基因,构建到pET-28a原核表达载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3),诱导IGF2BP3蛋白的表达.所获得的蛋白经镍柱亲和层析纯化,并用透析方法脱去尿素使蛋白复性,获得IGF2BP3原核表达蛋白.将制备的原核表达蛋白免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,再用ELISA、Western blot法、免疫组织化学法对抗体的反应性及特异性进行鉴定.结果 成功克隆出IGF2BP3基因,经测序与GenBank公布的序列一致;PCR酶切鉴定证实成功构建了pET-28a-IGF2 BP3原核表达载体;质粒在BL21(DE3)中成功表达出相对分子质量(Mr)为70 000左右的融合蛋白,纯化后经SDS-PAGE分析纯度在90％以上.ELISA确定抗体效价在1∶50 000以上,且Western blot法和免疫组织化学技术均证实多克隆抗体能特异性识别目的蛋白.结论 成功制备了特异性的小鼠抗人IGF2BP3的多克隆抗体.
胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白3、原核表达、多克隆抗体、肿瘤相关抗原
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R392.11;R392-33;Q786
国家自然科学基金青年基金81301495;中日友好医院青年英才计划2014-QNYC-B-12;国家科技支撑计划课题2012BAH24F05
2015-05-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
544-548
