流式细胞术检测全血白细胞吞噬白念珠菌方法的建立和应用

摘要：

目的 建立全血白细胞吞噬白念珠菌的流式细胞术检测方法.方法 绘制白念珠菌生长曲线后,取生长对数中期的白念珠菌,以活体细胞示踪荧光探针二乙酰羧基荧光黄琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)标记,与以PC5标记的CD45单克隆抗体预标记的全血白细胞,在37℃分别反应10、30、60 min(MOI≈10∶1),以流式细胞术观察CD45阳性细胞对白念珠菌的吞噬情况.结果 白念珠菌在液体酵母浸出粉胨葡萄糖培养基(YPD)中37℃、50 mL/L CO2培养,第5～11 h为对数生长期.10 mmol/LCFDA-SE染色30 min,可使白念珠菌均匀着色;CD45阳性细胞和标记的白念珠菌作用10、30、60 min,CD45阳性细胞中中性粒细胞的吞噬率分别为(80.1±6.1)％、(83.8±7.7)％和(92.3±11.2)％;单核细胞的吞噬率为(11.2±3.6)％、(15.8±4.4)％和(27.7±6.8)％,淋巴细胞作为无明显吞噬作用内参,其吞噬率为(0.9±0.3)％、(0.8±0.4)％和(5.2±1.6)％.结论 成功建立流式细胞术检测全血白细胞吞噬白念珠菌的方法,全血白细胞与白念珠菌共孵育30 min是较为合适的作用时间.

关键词：流式细胞术、白念珠菌、吞噬

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分类号：R379.4;R392.12(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：河北省自然科学基金C2010001882;河北省卫生厅指导性课题项目ZD20140031;白求恩国际和平医院计划课题201430

在线出版日期：2015-05-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：470-473