β2糖蛋白1多肽抗体的制备与应用
目的 利用人工合成β2糖蛋白1(β2GP1)多肽制备针对人源、鼠源β2GP1的多克隆抗体,并鉴定抗体的特异性及致病性.方法 应用Fmoc法化学合成β2GP1 N端第35 ～51位氨基酸的多肽,将合成后的多肽与钥孔血蓝蛋白(KLH)偶联,免疫新西兰大白兔制备抗血清,蛋白G纯化得到抗β2GP1多肽抗体,利用ELISA和Western blot法鉴定其效价和特异性.体外实验使用抗β2GP1多肽抗体/β2GP1复合物刺激C3 H/HeN小鼠腹腔巨噬细胞一定时间,收集细胞总RNA和总蛋白,实时定量PCR、Western blot法分别检测细胞组织因子(TF) mRNA和蛋白表达;Western blot法检测细胞p38、磷酸化p38、核因子κB p65(NF-κB p65)及磷酸化NF-κB p65表达情况;体内实验采用C3H/HeN小鼠腹腔注射抗β2GP1多肽抗体建立实验性抗磷脂综合征(EAPS)模型,检测小鼠外周血抗β2GP1抗体滴度及部分凝血活酶时间(APTT).结果 化学合成β2GP1多肽的纯度为94％,达到免疫用抗原标准.偶联KLH后免疫新西兰大白兔,其抗血清效价大于1∶32 000.Western blot结果显示抗β2GP1多肽抗体可特异性识别人源和鼠源β2GP1条带,双抗夹心ELISA检测表明该多肽抗体可与β2GP1隐蔽表位特异性结合.体外实验显示抗β2GP1多肽抗体/β2GP1复合物能够增强小鼠腹腔巨噬细胞p38、NF-κB p65磷酸化,诱导细胞TF mRNA及蛋白表达.体内实验成功建立EAPS小鼠模型,小鼠外周血抗β2GP1抗体滴度大于1∶3200,APTT明显缩短.结论 所制备的抗β2GP1多肽抗体可识别人源和鼠源β2GP1分子,能与β2GP1隐蔽抗原特异性结合且具有致病效应.
抗磷脂综合征、β2糖蛋白Ⅰ、多肽抗原、多克隆抗体
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R593.2(全身性疾病)
国家自然科学基金81370614;江苏省普通高校研究生科研创新计划CXZZ13_0702
2015-04-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
402-407
