miR-144通过靶向Atg4a调控卡介苗和雷帕霉素诱导的RAW264.7细胞自噬
目的 研究卡介苗(BCG)对RAW264.7细胞中与细胞自噬相关的miRNA(miR-21、miR-181a、miR-155和miR-144)表达的影响,并以miR-144为研究对象,验证miR-144对自噬相关基因Atg4a的靶向调控关系,探究其在结核分枝杆菌感染宿主细胞过程中调控细胞自噬途径的作用机制.方法 分别对RAW264.7巨噬细胞进行饥饿处理12 h、50 ng/mL雷帕霉素作用2h、10 nmol/L 3-甲基腺嘌呤(3-MA)作用12 h;BCG刺激RAW264.7巨噬细胞12 h、24h、48 h后,收集细胞,提取总RNA;利用实时定量PCR (qRT-PCR)检测miR-21、miR-181a、miR-155及miR-144的表达水平;构建pMIR-Report-Atg4a及pMIR-Report-Atg4a mut重组质粒,利用双萤光素酶报告系统、qRT-PCR及Western blot法验证miR-144与Atg4a的靶向作用关系.结果 BCG刺激RAW264.7巨噬细胞后,可使miR-21、miR-155及miR-144表达上调,miR-181a表达下调;经雷帕霉素诱导的细胞自噬,4种miRNA表达量与正常组相比分别上调约64倍、52倍、14倍、1倍;与正常组相比,3-MA处理细胞组,miR-21、miR-144、miR-155、miR-181a的表达量分别下调1.22倍、1.05倍、1.54倍及12.5倍;双萤光素酶报告系统及Western blot法证实,miR-144可靶向作用于Atg4a-3' UTR并抑制其表达.结论 miR-144可靶向抑制自噬相关基因Atg4a的表达,参与调控RAW264.7巨噬细胞的自噬过程.
miR-144、结核分枝杆菌、细胞自噬、靶向调控
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R392-33;R392.12
国家自然科学基金31160494;教育部“新世纪优秀人才支持计划”项目NCET 11-11023
2015-04-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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