鸡白痢沙门菌SpiC蛋白的原核表达及其应用
目的 进行鸡白痢沙门菌SpiC蛋白原核表达并建立以SpiC蛋白为检测抗原的间接ELISA.方法 以鸡白痢沙门菌S06004基因组DNA为模板,PCR扩增384 bp的spiC基因.将spiC基因克隆至原核表达载体pET30a中,构建重组原核表达质粒pET30a-spiC,再转化到表达宿主菌E.coli BL21(DE3)中,异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,SDS-PAGE和Westernblot分析鉴定,纯化His-SpiC蛋白,建立SpiC蛋白为检测抗原的间接ELISA并检测临床血清样品.结果 通过对诱导后重组菌裂解产物进行SDS-PAGE和Western blot分析,重组菌可以表达相对分子质量(Mr)约19 200的可溶性重组蛋白His-SpiC.重组蛋白GST-SpiC免疫无特定病原体鸡,所获得的高免血清能识别重组蛋白His-SpiC,表明体外表达的重组蛋白His-SpiC有良好的免疫反应原性.所建立的以重组蛋白His-SpiC介导的间接ELISA有较好的特异性,能够区分spiC基因缺失型疫苗候选株免疫与野生菌自然感染.结论 重组蛋白His-SpiC呈可溶性表达,具有良好的免疫原性,以重组蛋白His-SpiC建立的间接ELISA,可以作为区分感染和免疫动物(DIVA)鸡白痢疫苗免疫的鉴定方法.
鸡白痢沙门菌、来杭鸡、spiC基因、原核表达、间接ELISA
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R446.61;Q786;R378.2+2;S858.31(诊断学)
863项目2011AA10A212;国家自然科学基金31230070;中国博士后基金2014M551670
2015-04-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
149-152,158
