小鼠抗人前B细胞白血病同源盒基因3多克隆抗体的制备与鉴定

摘要：

目的 制备前B细胞白血病同源盒基因3(PBX3)多克隆抗体.方法 采用反转录PCR扩增PBX3基因区序列,并重组入原核表达载体pGEX-4T-1,重组载体转化BL21大肠杆菌,异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导GST-PBX3融合蛋白的表达.SDS-PAGE纯化融合蛋白,并用GST-PBX3融合蛋白免疫BALB/c小鼠,收集经过免疫的小鼠血清即抗PBX3的多克隆抗血清,采用间接ELISA检测其效价,通过免疫细胞化学技术及Western blot法鉴定其特异性.结果 成功构建pGEX-4T-1/PBX3原核表达载体,转化BL21菌株后可高效表达GST-PBX3融合蛋白,且以不可溶包涵体形式存在.SDS-PAGE纯化蛋白并免疫小鼠产生的抗PBX3血清可特异识别细胞外源过表达的PBX3蛋白,同时可检测到细胞外源性PBX3蛋白的细胞内定位情况.结论 获得效价和特异性良好的PBX3多克隆抗体.

关键词：前B细胞白血病同源盒基因3、融合蛋白表达、多克隆抗体

所属期刊栏目：30

分类号：R392.11;R392-33

资助基金：国家自然科学基金81201964,81372594,81301874,81330051;北京市自然科学基金5122012,7132051

在线出版日期：2014-12-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1176-1179