小鼠PD-L1胞外段基因的原核表达及活性分析

摘要：

目的 原核表达小鼠程序性死亡分子1配体胞外段(exPD-L1)蛋白基因并在体外初步验证其生物学活性.方法 应用小鼠脾脏细胞总RNA,反转录PCR克隆exPD-L1基因序列,将其克隆到pGEX-4T-1载体中构建原核表达载体pGEX-4T-1-exPD-L1,经酶切和测序鉴定正确后,转化到E.coli BL21(D3)中,经IPTG诱导表达后,对包涵体蛋白进行复性和纯化.对表达产物进行SDS-PAGE分析和Western blot法检测证明其正确后,采用GST pull-down检测融合蛋白和PD-1的相互作用,鉴定其生物学活性.结果 成功构建重组质粒pGEX-4T-1-exPD-L1,并在宿主菌中成功表达相对分子质量(Mr)55 000的重组蛋白,包涵体成功复性和纯化后经Western blot法证明其正确表达,同程序性死亡分子1(PD-1)蛋白的GST pull-down结果表明融合蛋白具有生物学活性.结论 成功克隆和表达小鼠exPD-L1蛋白,并证明其具有生物学活性.

关键词：小鼠PD-L1胞外段、融合蛋白、原核表达、抑制性信号

所属期刊栏目：30

分类号：Q934.3;R392-33(微生物学)

资助基金：国家自然科学基金81371364;陕西省自然科学基金重点项目2012JZ4002

在线出版日期：2014-09-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1047-1050