抗人肝细胞生长因子受体单链抗体慢病毒载体的构建和应用
目的 构建可表达抗人肝细胞生长因子受体(HGFR)单链抗体(scFv)的慢病毒表达载体,将其感染HEK293细胞,检测该抗体的表达及与抗原结合活性.方法 采用反转录PCR(RT-PCR)从分泌小鼠抗人HGFR抗体的杂交瘤细胞株(8E8)中扩增VH和VL基因,用重叠延伸PCR法将VH和VL进行拼接,得到含有信号肽SP-VH-linker-VL的单链抗体基因(HGFR-scFv),将其插入克隆载体pCR-Blunt中.用内切酶将HGFR-scFv基因从pCR-Blunt上切下,插入慢病毒载体pRRL-CMV中,经相应酶切和测序鉴定,正确构建慢病毒表达载体pRRL HGFR-scFv.磷酸钙法转染HEK293T细胞,48 h后通过荧光显微镜检测绿色荧光蛋白(GFP)的表达,将获得病毒颗粒进一步感染HEK293细胞,RT-PCR和ELISA检测scFv的表达情况.结果 抗人HGFR-scFv的慢病毒表达载体构建成功,病毒颗粒感染HEK293细胞后,得到了可以稳定表达抗人HGFR-scFv的细胞系;ELISA结果表明,scFv能与人HGFR特异性结合.结论 成功克隆了小鼠抗人HGFR抗体的scFv基因,并构建其慢病毒表达系统.
肝细胞生长因子受体、单链抗体、慢病毒表达载体
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R392.11;Q876;R446.61
江苏省自然科学基金BK2012162;苏州市科技发展计划SYG201131;苏州市生物新药创制重点实验室SZS201002
2014-09-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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