HBsAb靶向干扰素和IL-12双表达质粒pVAX-HBVE的构建与应用
目的 构建能同时表达HBsAb靶向干扰素(dsFvα)和人白细胞介素12(hIL-12)的新型基因治疗质粒pVAX-HBVE.方法 将pEE14.1-dsFvα质粒双酶切获得dsFvα片段,克隆入经同样双酶切后的载体pVAX-IRES-hIL-12 IRES序列的上游,构建重组表达质粒命名为pVAX-HBVE.将重组质粒瞬时转染HEK293T细胞,ELISA检测目的基因表达;提取重组质粒pVAX-HBVE,注射到乙肝转基因小鼠腿部肌肉并采用电穿孔递送,定量PCR检测注射前后转入1.3拷贝HBV全基因组的BALB/c小鼠体内HBV基因拷贝数的变化.结果 pVAX-HBVE经酶切和测序分析与预期设计完全一致,显示重组质粒构建成功;ELISA检测显示dsFvα和IL-12基因在细胞上清中获得表达;注射重组质粒pVAX-HBVE 30 μg仅1次即可使转基因小鼠体内的HBV基因拷贝数降低2个数量级.结论 成功构建能够含有靶向干扰素(dsFvα)和hIL-12的双表达质粒,为慢性乙肝基因治疗提供新的策略.
乙型病毒性肝炎、免疫基因治疗剂、HBsAb靶向性干扰素、IFN-α、hIL-12、真核表达
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R512.6+2;R446.61;R457.2(传染病)
国家自然科学基金31100655
2014-09-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
921-924
