结核分枝杆菌Zmp1基因原核表达载体的构建及表达鉴定

摘要：

目的 构建结核分枝杆菌锌离子依赖的金属蛋白酶1(Zmp1)基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达.方法 以卡介苗(BCG)基因组DNA为模板,采用PCR法扩增Zmp1基因;定向克隆到原核表达载体pET-32a(+)的多克隆位点中,构建重组原核表达质粒pET-32a(+)-Zmp1;转化入大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Westernblot法鉴定.结果 PCR法扩增出Zmp1基因;重组表达质粒经双酶切及基因测序鉴定构建正确;表达的重组Zmp1融合蛋白相对分子质量(Mr)约为94 000,大小与预期融合蛋白一致;重组Zmp1融合蛋白可与His标签单克隆抗体特异性结合.结论 成功构建了Zmp1基因原核表达载体,并在大肠杆菌BL21 (DE3)中获得重组Zmp1融合蛋白表达.

关键词：结核分枝杆菌、Zmp1、原核表达

所属期刊栏目：30

分类号：R392-33;Q786;R378.91+1;R52

资助基金：重庆市自然科学基金cstc2012jjA10023;国家自然科学基金30771922,30901280

在线出版日期：2014-05-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：573-575,580