血清反应因子促进人腹膜间皮细胞的转分化
目的 探讨血清反应因子(SRF)在人腹膜间皮细胞(HPMC)转分化中的作用.方法 腹膜间皮细胞由腹膜透析(PD)患者透出液离心后进行培养,观察不同透龄患者的原代腹膜间皮细胞改变,并用免疫荧光细胞化学方法检测SRF及α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Snail、E-钙黏素(E-cadherin)的表达.细胞经高糖刺激发生转分化后,将SRF siRNA转染至细胞中使SRF下调,用免疫荧光细胞化学技术及Western blot法检测E-cadherin和α-SMA、Snail的表达.采用染色体免疫共沉淀(ChIP)及报告基因方法检测SRF与Snail的结合情况.结果 无菌收集50例PD患者透出液,原代培养HPMC,随着透析时间的延长,细胞从铺路石样逐渐转变为成纤维细胞样;SRF表达显著增强时,间质标志分子α-SMA的表达增强,而上皮标志分子E-cadherin 表达减弱.永生化的HPMC经高糖刺激72 h使其发生转分化后,用小干扰RNA使SRF沉默.与对照组相比,免疫荧光细胞化学染色显示SRF下调后,α-SMA、Snail的表达明显减弱,而E-cadherin表达明显增强;Western blot结果显示SRF的表达水平降低时,E-cadberin表达升高,而α-SMA、Snail的表达明显减少.ChIP结果提示,SRF可与Snail启动子区2个结合位点SRE1和SRE2结合,报告基因结果显示,SRF主要与SRE2位点结合并启动Snail的表达.结论 SRF在已发生间充质转分化的HPMC或腹膜纤维化时高表达,可能通过启动Snail表达来促进HPMC转分化.
上皮间质转分化、血清反应因子、E-钙黏素、α平滑肌肌动蛋白
30
R459.5;R392-33;Q254(治疗学)
国家自然科学基金81270849,81270768;陕西省科技攻关项目2012K16-08-05
2014-05-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共4页
521-524
