结核分枝杆菌小分子热休克蛋白16.3蛋白的原核表达及功能检测

摘要：

目的 进行结核分枝杆菌小分子热休克蛋白MTB Hsp16.3原核表达载体的构建、表达、纯化并初步观察其生物学效应.方法 提取临床H37Rv分离株基因组DNA,PCR扩增Hsp16.3基因,将其重组到原核表达载体Pet28a中,构建原核表达载体Pet28a-Hsp16.3,进行双酶切及测序鉴定.将测序正确的重组质粒转化至E.coli BL21 (DE3)中,经IPTG诱导表达后,对表达产物进行SDS-PAGE检测,同时通过镍柱纯化试剂盒纯化Hsp16.3,测定纯化后蛋白浓度,并进行Western blot法检测.将不同浓度纯化后蛋白作用小鼠腹腔巨噬细胞,实时定量PCR(qRT-PCR)检测巨噬细胞IL-10和IFN-γ的表达,同时设定空白对照组及阳性对照组.结果 成功构建重组质粒Pet28a-Hsp16.3,并在E.coli BL21 (DE3)中获得成功表达,通过镍柱纯化系统得到纯化Hsp16.3融合蛋白.qRT-PCR检测结果显示,不同浓度纯化后Hsp16.3蛋白作用小鼠腹腔巨噬细胞,可促进IFN-γ的产生而抑制IL-10的产生.结论 成功克隆、表达和纯化了MTB Hsp16.3蛋白,Hsp16.3能促进小鼠腹腔巨噬细胞产生IFN-γ,抑制IL-10的产生.

关键词：热休克蛋白16.3、蛋白纯化、巨噬细胞

所属期刊栏目：30

分类号：R392.11;R825.2

资助基金：贵州省科学技术基金黔科合J字[2008]2188;贵州省优秀科技教育人才省长基金黔科教办[2010]04号

在线出版日期：2014-05-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：480-484