溶酶体相关膜蛋白2A shRNA对乳腺癌细胞株紫杉醇耐药的影响
目的 制备针对人溶酶体相关膜蛋白2A(LAMP2A)的shRNA重组慢病毒,获得稳定低表达LAMP2A的MDA-MB-231乳腺癌细胞株,观察LAMP2A分子下调对乳腺癌细胞紫杉醇耐药性的影响.方法 通过对LAMP2A的mRNA序列分析,设计了4条shRNA,通过基因重组技术构建pGLV-EGFP-shRNA慢病毒表达质粒,并测序鉴定.将构建的表达质粒和包装质粒共转染人胚肾HEK293T细胞包装产生慢病毒,测定病毒滴度.将构建的shRNA慢病毒表达载体感染人乳腺癌MDA-MB-231细胞,嘌呤霉素筛选获得稳定细胞株后,Western blot法检测LAMP2A表达,验证蛋白表达抑制效果.采用1nmol/L、10 nmol/L、100nmoVL的紫杉醇处理LAMP2A低表达乳腺癌细胞株后,用MTT法观察LAMP2A低表达组和对照组之间增殖效率的差异.结果 测序结果显示重组慢病毒质粒构建正确,病毒滴度达2×108 TU/mL.乳腺癌稳定细胞株中LAMP2A蛋白表达量显著降低.在10 nmol/L、100nmol/L紫杉醇处理后,LAMP2A低表达乳腺癌细胞株对紫杉醇耐药性明显降低(P＜0.05).结论 成功构建了人的LAMP2A基因shRNA慢病毒载体,获得了稳定低表达LAMP2A的乳腺癌细胞株,证实LAMP2A下调能够降低乳腺癌细胞株对紫杉醇的耐药性.
溶酶体相关膜蛋白2A、小发夹RNA、慢病毒载体、紫杉醇
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Q811.4;R392.11;R392-33;R446.62(生物工程学(生物技术))
国家自然科学基金81272909
2014-03-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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