施马伦贝格病毒核衣壳蛋白单克隆抗体的制备及其特性分析
目的 制备施马伦贝格病毒(SBV)核衣壳蛋白(N)的单克隆抗体(mAb)并分析其特性.方法 将SBV N基因分别构建至pET-28a-c(+)和pMAL-c5X载体中,在大肠杆菌中诱导表达带组氨酸标签的融合蛋白His-SBV-N和带麦芽糖结合蛋白(MBP)标签的融合蛋白MBP-SBV-N,分别用镍-次氮基三乙酸(Ni-NTA)树脂和直链淀粉树脂纯化两种蛋白;用纯化的His-SBV-N免疫BALB/c小鼠制备mAb,以MBP-SBV-N为包被抗原间接ELISA筛选分泌mAb的杂交瘤细胞和测定mAb效价,利用蛋白G琼脂糖凝胶从腹水中纯化mAb;应用Western blot和间接免疫荧光分析mAb的反应性和特异性.结果 筛选并纯化出1株抗SBV的mAb(命名为1F2),效价为1∶32 000,重链亚型为IgG2α,轻链为κ;1F2既能与重组SBV N蛋白发生反应,又能识别SBV,但与布尼亚病毒科内亲缘关系较近的沙门达病毒、道格拉斯病毒和赤羽病病毒的N蛋白存在交叉反应,而与裂谷热病毒N蛋白无交叉反应.结论 成功制备了抗SBV核衣壳蛋白的mAb,为SBV的血清学检测提供了工具.
施马伦贝格病毒、核衣壳蛋白、原核表达、单克隆抗体
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R392.11;Q813.2;R373
“十二五”国家科技支撑计划课题2013BAD12B01;国家质检总局科技计划项目2013IK054;中国检验检疫科学研究院基本科研业务费专项资金2012JK011
2014-01-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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