慢病毒介导的shRNA对A549细胞Pin1表达的干扰作用

摘要：

目的 构建Pin shRNA慢病毒载体,建立稳定抑制肽基脯氨酰顺反异构酶1(Pin1)表达的A549细胞系.方法 根据查阅文献获得Pin1 shRNA干扰靶点序列并插入pLenR-GPH载体,构建pLenR-GPH-Pin1 shRNA慢病毒载体,随后转入人胚肾HEK293T细胞中,收集其上清进行病毒滴度测定,再行慢病毒的包装,将获得的慢病毒毒液感染A549细胞.通过实时定量PCR(qRT-PCR)及Western blot法检测Pin1在不同组的表达抑制情况.结果 经限制性内切酶鉴定及测序分析,成功构建了pLenR-GPH-Pin1 shRNA慢病毒载体质粒,包装并得到高滴度的病毒颗粒.通过qRT-PCR和Western blot法检测显示,与对照组相比,pLenR-GPH-Pin1shRNA慢病毒载体感染的A549细胞中Pin1的表达在mRNA和蛋白水平均有所下降.结论 慢病毒介导的shRNA能够有效下调A549细胞中Pin 1的表达.

关键词：肽基脯氨酰顺反异构酶1(Pin1)、慢病毒载体、A549细胞、基因表达

所属期刊栏目：30

分类号：R392-33;Q813.1+1;R734.2

资助基金：中华儿科杂志第二届双鹤珂立苏科研基金2010年;四川省教育厅科研基金08ZA150;四川省卫生厅科研基金90191

在线出版日期：2014-01-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：245-249