HPV16型E7重组蛋白的表达及其多克隆抗体的制备

摘要：

目的 制备人乳头瘤病毒(HPV) 16型E7原核表达蛋白及其多克隆抗体.方法 用PCR方法从宫颈癌组织中扩增HPV16 E7基因,克隆至pET21 a(+)载体并构建pET21a(+)/HPV16 E7重组质粒,测序鉴定;将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导后表达重组蛋白,用Ni-NTA亲和层析法纯化并经SDS-PAGE及Western blot分析鉴定;纯化的HPV16 E7重组蛋白免疫日本大耳白兔制备多克隆抗体,用ELISA检测多克隆抗体的效价,并用Western blot法及免疫荧光技术分析多克隆抗体的特异性.结果 HPV16 E7重组蛋白可通过原核表达系统进行表达和纯化;通过兔免疫后可制备特异性的多克隆IgG抗体,效价达1∶30 000;经Western blot法和免疫荧光染色结果证实兔多克隆抗体可特异性识别HPV16 E7蛋白.结论 成功进行了HPV16 E7原核表达并制备了HPV16 E7兔多克隆抗体.

关键词：人乳头瘤病毒、E7蛋白、多克隆抗体

所属期刊栏目：30

分类号：R392.11;R711.32;R373.9;R752.9

资助基金：国家自然科学基金81172463

在线出版日期：2014-03-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：167-170,175