基于鞭毛蛋白的H5亚型禽流感疫苗候选株的构建及鉴定
目的 构建基于鞭毛蛋白的H5亚型禽流感疫苗候选株.方法 以H5N1禽流感病毒血凝素(HA)基因和鼠伤寒沙门菌SL7202基因组为模板,通过重叠PCR扩增出HA1-2-fljB基因片段,将其插入原核表达载体pET32a(+),构建重组质粒pET32a-HA1-2-fljB,再将其转化表达菌E.coli BL21 (DE3),IPTG诱导目的蛋白表达.SDS-PAGE和Western blot法鉴定分析融合蛋白HA1-2-fljB.通过刺激HEK293-TLR5细胞,检测融合蛋白的TLR5生物学活性.结果 正确构建出重组质粒pET32a-HA1-2-fljB,SDS-PAGE显示,融合蛋白HA1-2-fljB相对分子质量(Mr)约为100 000,Western blot法表明融合蛋白具有良好的免疫反应性.TLR5生物活性实验结果显示,与HA1-2蛋白刺激组相比,HA1-2-fljB诱导HEK293-TLR5细胞分泌了高水平的IL-8(P<0.01).结论 成功表达出具有TLR5活性的融合蛋白HA1-2-fljB,为研究H5亚型禽流感新型疫苗奠定了基础.
H5亚型禽流感、鞭毛蛋白、血凝素、原核表达
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R378;S855.3(医学微生物学(病原细菌学、病原微生物学))
国家自然科学基金31172299;教育部“新世纪优秀人才支持计划”项目NCET-12-0745;江苏省第四期“333工程”第三层次培养对象项目;江苏省第九批“六大人才高峰”高层次人才项目NY-028;江苏省高校“青蓝工程”中青年学术带头人项目2012年度;教育部创新团队基金IRT0978;江苏省优势学科建设工程2010年
2014-03-12(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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117-120,130