miR-508-5P慢病毒过表达载体的构建及对S期激酶相关蛋白2靶向调控作用
目的 构建miR-508-5p慢病毒过表达载体,探讨其对SKP2基因的靶向调控作用.方法 基于化学法合成miR-508-5p茎环结构RNA,将其克隆入线性化的pSicoR质粒中,经双酶切及测序鉴定,将阳性重组体转染至HEK293T细胞;同时构建与miR-508-5p互补靶基因SKP2的3 '非翻译区(3'UTR),将其克隆入线性化的pMIR-Report载体中.通过相对荧光素酶活性、Western blot法及实时荧光定量PCR (qRT-PCR)法验证miR-508-5p与SKP2 3'UTR的靶向调控关系.结果 经PCR、酶切及测序结果证明成功构建了pSicoR-miR-508-5p及pMIR-Report-SKP2-3'UTR重组质粒,并通过实验证实miR-508-5p过表达明显抑制SKP2的蛋白表达水平及mRNA相对含量(P＜0.05);抑制miR-508-5p的表达,则明显上调SKP2的蛋白表达水平及mRNA相对含量(P＜0.05).结论 成功构建pSicoR-miR-508-5p慢病毒过表达载体,证实通过靶向作用于SKP2-3' UTR的特异序列直接抑制SKP2基因的表达.
microRNA、miR-508-5P、S期激酶相关蛋白2
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R392.12;Q253;Q255
国家自然科学基金31160494;教育部“新世纪优秀人才支持计划”NCET 11-11023;中国博士后特别基金2012T50834;中国博士后基金20110491554
2013-12-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共5页
28-32
