抗鼠疫耶尔森菌荚膜抗原F1嵌合抗体的制备及活性分析

摘要：

目的 在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中表达抗鼠疫耶尔森菌荚膜抗原F1嵌合抗体,并对其活性进行分析.方法 将具有保护活性的鼠源单克隆抗体(mAb)的轻、重链可变区基因,分别与人κ型轻链恒定区、IgG1重链恒定区基因融合后构建轻重链嵌合抗体基因,克隆到T载体上进行序列测定确证.然后分别构建含有嵌合轻、重链基因的表达载体pcDNA3.1-L和pcDNA3.1-H.构建完成的表达载体电转化CHO-S细胞,G418筛选获得稳定表达细胞株.扩大培养、收集上清用MabSelect Sure亲和层析填料纯化.纯化后的抗体进行SDS-PAGE、ELISA、Western blot分析以及小鼠体内保护活性评价.结果 PCR鉴定及测序结果表明pcDNA3.1-H和pcDNA3.1-L构建完成,序列正确；Dot blot结果表明获得表达量高的稳转株细胞；SDS-PAGE及Western blot法证明抗体纯化获得成功,ELISA结果表明该抗体具有结合与F1抗原的活性；小鼠体内攻击实验表明其保护活性与鼠mAb大致相同.结论 成功在CHO-S细胞中表达了具有中和活性的抗F1人-鼠嵌合抗体.

关键词：鼠疫、F1、嵌合抗体、中国仓鼠卵巢细胞

所属期刊栏目：29

分类号：R392.11;R392-33;R446.61;Q813.1+1

资助基金：国家自然科学基金81000710;"重大新药创制"科技重大专项2013ZX09304103

在线出版日期：2013-11-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1299-1302,1306