携带hFGF21基因慢病毒的制备及鉴定

摘要：

目的 包装人成纤维细胞生长因子21(hFGF21)慢病毒颗粒、确定包装细胞人胚肾293T(HEK293T)细胞的形态特征以及对目的基因的转导能力.方法 对慢病毒重组质粒Lv105-hFGF21进行测序鉴定,在HEK293T细胞中包装为慢病毒颗粒并浓缩,经反转录PCR(RT-PCR)和电镜检测鉴定后,利用实时定量PCR测定病毒滴度.然后感染Vero细胞,经RT-PCR检测hFGF21 mRNA的表达、免疫荧光检测hFGF21蛋白的表达.结果 RT-PCR结果表明重组慢病毒能转录hFGF21 mRNA,电镜检测结果可以看到典型的慢病毒颗粒形态特征,其直径在40 ～70 nm;重组病毒原液的滴度是3.68×108 VG/mL、浓缩液的滴度是1.25×109 VG/mL；重组慢病毒感染Vero细胞后经RT-PCR检测到细胞中有hFGF21 mRNA表达,免疫荧光测到Veto细胞中有hFGF21蛋白表达.结论 成功包装了hFGF21慢病毒颗粒并在靶细胞中获得表达.

关键词：人成纤维细胞生长因子-21、慢病毒颗粒、细胞、表达

所属期刊栏目：29

分类号：R392.11;Q786;Q343.3+7;Q813.1+1

资助基金：协和青年科研基金资助课题2012D14

在线出版日期：2013-11-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1258-1261,1266