小鼠CD40分子胞外段基因的克隆、原核表达及活性鉴定

摘要：

目的 构建含小鼠CD40(mCD40)分子胞外段序列的原核表达载体,在大肠杆菌中表达,并对mCD40/GST融合蛋白进行纯化和抗原活性鉴定.方法 从小鼠DC2.4细胞系中扩增目的基因mCD40并克隆至原核表达载体pGEX-6P-1,构建重组表达载体pGEX-6P-1-mCD40,并将该载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达mCD40/GST融合蛋白,并采用GST琼脂糖凝胶纯化重组蛋白.纯化后的重组蛋白经Western blot法、间接ELISA鉴定其抗原活性.结果 PCR扩增产物经测序分析与GenBank公布的小鼠CD40胞外段序列一致；重组表达载体经酶切鉴定正确；IPTG诱导后经SDS-PAGE分析证实得到了相对分子质量(Mr)为45 000的重组蛋白；Western blot法和ELISA检测证实纯化的mCD40/GST蛋白能够与特异性抗体发生反应.结论 成功构建了原核表达载体pGEX-6P-1-mCD40,利用原核表达系统实现了mCD40/GST融合蛋白的可溶性表达并证明其具有较高的抗原活性.

关键词：CD40、原核表达、蛋白纯化、活性检测

所属期刊栏目：29

分类号：R392.11;R446.61;R392-33

资助基金：国家自然科学基金30840094;国家高技术研究发展计划8632007AA02Z451

在线出版日期：2013-11-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1200-1204