霍乱弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA的建立

摘要：

目的 制备霍乱弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体(mAb)、建立双抗体夹心ELISA并初步应用于食品检测.方法 采用差速离心法提取霍乱弧菌Vc75菌株的鞭毛蛋白,并以此为抗原免疫BALB/c小鼠,抗血清效价达到1∶32 000时,取脾细胞与生长良好的对数期Sp2/0骨髓瘤细胞进行融合.多次克隆化培养后获得杂交瘤细胞株并制备腹水,纯化后得到抗体.结果 获得6株持续、稳定分泌抗霍乱弧菌鞭毛蛋白mAb的杂交瘤细胞株,命名为VcNo.1～VcNo.6,抗体效价高达1∶2×106.SDS-PAGE结果显示,提取出的鞭毛蛋白相对分子质量(Mr)为44 000并且纯度较高.采用VcNo.6抗体建立了霍乱弧菌双抗体夹心ELISA,该方法的检测灵敏度达到103 CFU/mL菌液,通过采用100株霍乱弧菌和101株非霍乱弧菌进行特异性实验,100株霍乱弧菌呈阳性反应,101株非霍乱弧菌呈阴性反应,结果表明VcNo.6抗体具有良好的特异性.在基质添加试验中,最低检出限为1CFU/g样品.结论 成功制备了霍乱弧菌鞭毛蛋白mAb,并将其应用于双抗体夹心ELISA,该方法的检测灵敏度达到103CFU/mL菌液,与所测试的非霍乱弧菌没有交叉反应.

关键词：霍乱弧菌、鞭毛蛋白、单克隆抗体、双抗体夹心ELISA

所属期刊栏目：29

分类号：R392.11;R378.3;Q789

资助基金：科技部公益性行业科研专项201110034

在线出版日期：2013-11-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1169-1173