人脐带间充质干细胞的原代培养及多向分化潜能的研究
目的 探讨人脐带间充质干细胞(hUCMSC)的体外分离培养鉴定方法及多向分化潜能.方法 应用Ⅱ型胶原酶和透明质酸酶联合消化法及组织贴块培养法对hUCMSC进行体外培养.在倒置显微镜下观察不同方法获得的hUCMSC的生长特点；台盼蓝法测定细胞传代成活率；采用生长曲线、MTT法测定hUCMSC的增殖、流式细胞术(FCM)测定细胞周期变化及细胞免疫表型变化；采用相应试剂盒鉴定其向成脂细胞、成骨细胞的分化,采用免疫荧光细胞化学技术检测向成心肌样细胞的分化、采用荧光标记技术检测hUCMSC向血管内皮细胞的分化.结果 酶消化法分离培养的细胞1d后,在倒置相差显微镜下可见细胞贴壁呈圆形生长,4d后生长迅速呈长梭形,7d后由中心向周围生长且增殖明显,10 d后达80％融合即可传代；贴块法培养的细胞7d后,可见细胞从组织块边缘长出,10 d后细胞数量逐渐增多,16 d后细胞生长迅速呈单层致密排列即可传代,细胞传代成活率均为96％以上.2种方法获得的第3代细胞生长曲线近似“S”形、MTT法显示3～5d细胞增殖较明显；酶消化法培养的细胞G0/G1期和S+G2/M期所占比例分别为88.78％和10.21％,组织贴块法培养的细胞G0/G1期和S+G2/M期所占比例分别为84.82％和13.87％,细胞DNA周期无明显差异；2种方法获得的细胞经FCM检测CD90、CD105、CD73阳性率均为99％以上为高表达；CD45、CD34、CD14、CD11b、CD79a、CD19、HLA-DR低表达；2种方法获得的细胞在体外诱导都能向成骨细胞、成脂细胞、成心肌样细胞及血管内皮细胞分化,其诱导阳性率均为90％以上.结论 酶消化法和贴块法均可高效获得hUCMSC,与贴块法培养相比较,酶消化法能更有效的获得扩增迅速、细胞成分单一的细胞.
人脐带间充质干细胞、原代培养、诱导分化
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R392-33;Q254;Q813.1+1
国家自然科学基金81070077;省部共建重点教育部心血管重塑相关疾病重点实验室项目110267;北京市优秀人才培养资助项目2012D003034000009;北京市自然科学基金7072012
2013-10-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
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