携带p53AIP1基因的重组复制缺陷型腺病毒载体的构建、鉴定及其在人宫颈癌细胞系HeLa中的表达

摘要：

目的 构建携带外源性p53调节的凋亡诱导蛋白1 (p53AIP1)基因重组复制缺陷型腺病毒载体,观察其在HeLa细胞中的表达.方法 设计针对p53AIP1基因序列并插入特定酶切位点的特异引物,通过PCR扩增p53AIP1基因序列,利用DNA重组技术将p53AIP1基因定向插入到腺病毒穿梭载体pDC316,构建穿梭质粒pDC316-p53AIP1；在LipofectamineTM 2000介导下穿梭载体pDC316-p53AIP1和腺病毒骨架载体pBHGlox△E1,3Cre共转染进HEK293细胞；通过Cre-loxP重组酶系统,使Shuttle质粒和辅助大质粒发生定点重组从而包装产生携带目的基因p53AIP1的复制缺陷型重组腺病毒(Ad-p53AIP1).将Ad-p53AIP1和Ad-null按MOI=100感染HeLa细胞,应用Western blot法检测蛋白水平的表达.结果 基因片段成功连入pDC316载体上,对所构建新载体分别行PCR扩增、酶切、测序鉴定,与预计一致.Western blot法检测证实,Ad-p53AIP1感染HeLa细胞后蛋白有表达.结论 成功构建携带p53AIP1基因的重组复制缺陷型腺病毒载体,并且有较强的感染能力.

关键词：p53调节的凋亡诱导蛋白1、腺病毒载体、HeLa细胞、基因治疗

所属期刊栏目：29

分类号：R392.12;Q786

资助基金：国家自然科学基金81201612;国家高技术研究发展计划8632007AA02Z451

在线出版日期：2013-10-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1082-1086