创伤弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体的制备及在食品检测中的应用

摘要：

目的 制备创伤弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体(mAb)并建立双抗夹心ELISA.方法 采用差速离心法提取创伤弧菌ATCC 1.1758菌株的鞭毛蛋白,并以此为抗原免疫BALB/c小鼠,抗血清效价达到1∶32 000时,取脾细胞与生长良好的对数期Sp2/0骨髓瘤细胞进行融合.采用杂交瘤技术和ELISA制备并筛选分泌mAb的杂交瘤细胞株,有限稀释法对阳性孔克隆化培养.制备腹水,纯化以得到抗体.结果 获得5株持续、稳定分泌抗创伤弧菌鞭毛蛋白mAb的杂交瘤细胞株,命名为VVNo.1～VVNo.5,抗体效价高达1∶(2×106).SDS-PAGE结果显示,提取出的鞭毛蛋白相对分子质量(Mr)为44 000并且纯度较高.采用VVNo.5抗体建立了创伤弧菌双抗夹心ELISA,该方法的检测灵敏度达到103 CFU/mL菌液,通过采用12株创伤弧菌和130株非创伤弧菌进行特异性实验,12株创伤弧菌呈阳性反应,130株非创伤弧菌呈阴性反应,结果表明WNo.5抗体具有良好的特异性.在基质添加试验中,通过增菌,最低检出限为2 CFU/25 g样品.结论 成功制备了创伤弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体,并将其应用于双抗夹心ELISA,该方法的检测灵敏度达到1×103 CFU/mL菌液,与所测试的非目标菌没有交叉反应.

关键词：创伤弧菌、鞭毛蛋白、单克隆抗体、双抗夹心ELISA

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分类号：R392.11;R446.61;R378.3;Q813.2

资助基金：国家质检总局公益性行业科研专项201110034

在线出版日期：2013-10-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1068-1071,1075