抗卵泡刺激素受体纳米抗体的制备及鉴定
目的 获得抗卵泡刺激素受体(FSHR)的纳米抗体.方法 使用原核表达的重组蛋白His-FSHR234对新疆双峰驼单域抗体噬菌体展示文库进行亲和筛选,将筛选获得的重链抗体的可变区(vhh)基因亚克隆至pET30a表达载体,转化E.coli BL21 (DE3),IPTG诱导表达VHH重组蛋白,镍离子亲和层析柱纯化获得纳米抗体.ELISA检测纳米抗体的抗原结合活性.结果 His-FSHR234筛选富集后,随机挑选40个克隆进行鉴定,其中28个为阳性克隆,挑选4个vhh基因进行克隆,PCR和酶切鉴定目的基因大小与预计相符.SDS-PAGE显示,VHHFSHR-06、VHHFSHR-25、VHHFSHR-30、VHHFSHR-50分别在相对分子质量(Mr)31000、26000、25000、26000有目的条带.EHSA检测显示,4个纳米抗体对His-FSHR234重组蛋白均具有结合活性,其中VHHFSHR-06的抗原结合活性最高.结论 从新疆双峰驼单域抗体噬菌体展示文库中筛选获得了1个具有较高抗原结合活性的抗FSHR的纳米抗体.
纳米抗体、卵泡刺激素受体、生物淘洗、双峰驼
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Q789;R392.11;Q782(基因工程（遗传工程）)
新疆自治区高技术研究发展项目201110102;国家自然科学基金81260333
2013-08-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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