半胱氨酸和甘氨酸富集蛋白1的基因克隆真核表达及细胞定位

摘要：

目的 构建带FLAG标签的半胱氨酸和甘氨酸富集蛋白1(CRP1)的真核表达载体,明确该融合蛋白在人胚肾293T细胞、肝癌HepG2细胞和乳腺癌ZR75-1细胞中的表达及定位情况.方法 采用PCR技术从乳腺cDNA文库中扩增出人CRP1基因,并将其插入到pCMV-Tag2B表达载体中；将重组质粒转染人胚肾293T细胞、肝癌HepG2细胞、乳腺癌ZR75-1细胞,Western blot法检测转染细胞的表达情况；荧光显微镜观察pCMV-FLAG-CRP1在人胚肾293T细胞、肝癌HepG2细胞、乳腺癌ZR75-1细胞中的定位.结果 双酶切和测序鉴定表明,pCMV-FLAG-CRP1真核表达质粒构建成功；Western blot法检测pCMV-FLAG-CRP1转染293T细胞、肝癌HepG2细胞、乳腺癌ZR75-1细胞后成功表达；荧光显微镜下观察,在293T、HepG2、ZR75-1细胞中,CRP1在细胞质和细胞核中均有分布,且胞质信号强于胞核.结论成功构建pCMV-FLAG-CRP1真核表达载体,CRP1可在不同细胞中的胞质和胞核表达.

关键词：半胱氨酸和甘氨酸富集蛋白1(CRP1)、293T细胞、HepG2细胞、乳腺癌ZR75-1细胞

所属期刊栏目：29

分类号：R392-33;Q813.1;Q786

资助基金：国家自然科学基金30872939,31100604,81101065

在线出版日期：2013-07-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：690-693