转基因表达HBV抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞受体
目的 通过逆转录病毒介导HBV抗原特异性细胞毒性T细胞(CTL)的T细胞受体(TCR)转基因表达,初步观察其结合活性.方法 从HLA-A2阳性急性乙肝患者外周血中诱导、分选、克隆和扩增HBV抗原特异性CTL;提取细胞RNA,用RT-PCR、5'-RACE和OVER-LAP PCR等方法获取TCR的α和β链编码基因；构建TCR重组逆转录病毒,介导特异性TCR分别在人Jurkat T细胞和HLA-A2阳性健康人CD8 T淋巴细胞上表达.结果 从1例HLA-A2阳性急性乙肝患者样本中分别获得了2组TCR Vα、Vβ配对,分别命名为α21β13、α15β13,包装的重组逆转录病毒滴度为(1.5 ～5.0)×105 IU/mL,用针对目标TCR的特异性Vβ链抗体(抗Vβ13 TCR-PE)和HLA-A2限制性表位特异性五聚体(pentamer)进行免疫荧光染色,重组TCR在T细胞表面获得表达:其中在Jurkat细胞上转入的Vβ13链表达细胞占1.06％ ～2.25％,在HLA-A2阳性健康人T细胞上Vβ13阳性细胞和pentamer阳性细胞分别占到1.03％ ～2.06％和1.05％ ～1.12％,在HLA-A2阴性健康人T细胞上Vβ13阳性细胞和pentamer 阳性细胞均低于0.05％.结论 通过逆转录病毒介导可以使HBV特异性CTL TCR获得转基因表达,具有结合HLA-A2限制性表位的活性.
乙型肝炎病毒、细胞毒性T淋巴细胞、T细胞受体、表位特异性、表达
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R392.11;R373.2+1
国家自然科学基金30771898;军队"十一五"医药卫生科研杰出人才项目06J024
2013-07-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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