人组蛋白H3真核表达载体的构建及功能初步检测
目的 构建带myc标签的人组蛋白H3基因真核表达载体,获得Myc-H3融合表达蛋白,并对其功能进行初步检测.方法 采用PCR技术从乳腺文库中扩增人H3基因编码序列,将其正确插入pXJ-40-myc载体,重组质粒转染人胚肾293T细胞,W3st3rn blot法检测融合蛋白表达,通过免疫共沉淀技术检测融合蛋白与已知结合蛋白组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶(LSD1)和组蛋白甲基转移酶(EZH2)的相互作用.结果 构建得到组蛋白H3基因的真核表达载体,双酶切鉴定得到与预期片段大小相符的外源基因插入片段,经测序与目的序列完全一致；经Western blot法检测,融合蛋白成功表达；免疫共沉淀检测证实Myc-H3融合蛋白可以和已知相互作用蛋白LSD1及EZH2相互作用.结论 成功构建组蛋白H3真核表达载体,该融合蛋白正确表达.
甲基化、H3、LSD1、EZH2、相互作用
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R392-33;Q786;Q512+.6
国家自然科学基金30872939,31100604
2013-08-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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