含猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白基因片段的重组腺病毒构建与鉴定

摘要：

目的 构建猪链球菌2型(SS2)溶菌酶释放蛋白(MRP)基因片段的重组腺病毒并对其进行鉴定.方法 根据MRP的基因序列,设计合成1对引物,以SS2型基因组为模板,扩增MRP基因片段(467-1351)序列.将PCR产物通过pMD18-T载体克隆后,再连接至腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中构建重组穿梭质粒pShuttle-CMV-MRP,再经PmeI酶切,然后转化至含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183-AD-1感受态细胞中,经同源重组获得重组腺病毒质粒pAdeno-CMV-MRP.PacI酶切线性化该重组腺病毒质粒,再转染AD-293细胞进行病毒包装,最后对细胞包装的病毒液进行PCR和Western blot法鉴定.结果 重组腺病毒质粒pAdeno-CMV-MRP转染AD-293细胞8d后出现明显的细胞病变,在培养细胞的上清病毒液中也检测到了MRP基因片段及其表达的蛋白.结论 成功构建了SS2型MRP基因片段的重组腺病毒(rAdeno-MRP).

关键词：猪链球菌2型、溶菌酶释放蛋白(MRP)、重组腺病毒

所属期刊栏目：29

分类号：R392-33;S858.28

资助基金：江西省教育厅科技项目GJJ12624;九江学院高层次人才引进科研启动项目8870909

在线出版日期：2013-08-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：350-353