人抗凝血酶Ⅲ的表达及其抗血清的制备
目的 用大肠杆菌系统表达重组的抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ),制备其抗血清并测定效价.方法 利用基因克隆技术获得AT-Ⅲ基因片段,构建原核表达质粒pET32a(+)-AT-Ⅲ,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,IPTG诱导表达、蛋白纯化并免疫兔,间接ELISA、Western blot法检测抗血清.结果 SDS-PAGE、Western blot法检测原核表达蛋白结果显示,在相对分子质量(Mr)77 000附近出现特异性条带.对该融合蛋白进行分离纯化后免疫新西兰兔,制备AT-Ⅲ抗血清,间接ELISA方法检测抗血清的最高效价可达到1∶12 800,Western blot分析表明抗血清可与293T、CHO细胞表达的AT-Ⅲ蛋白及AT-Ⅲ蛋白纯品特异性结合.结论 成功制备了人抗凝血酶Ⅲ抗血清.
抗凝血酶Ⅲ、原核表达、检测、抗血清
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R392.11
国家自然科学基金31272586;国家转基因重大专项2009ZX08007-006B,2011ZX08007-002,2011ZX08008-004;山东省青年自然科学基金ZR2010ZR029;山东省自然基金ZR2010CM012;济南市高校院所自主创新计划201004027
2013-03-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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