重组人乙酰胆碱受体α亚单位胞外域在CHO细胞中的表达
目的 获得具有生物学活性的重组人烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)α1亚基胞外域(ECD)蛋白.方法 从TE761细胞中提取人nAChR α1亚单位全长基因,以PCR法扩增nAChR α1亚基ECD1-216,酶切后装入pcDNA3.1表达载体中,脂质体转染入CHO细胞,分别在转染后6～72 h的7个时间点进行荧光实时定量PCR鉴定ECD基因的表达水平,利用125I标记的银环蛇毒素测定细胞培养上清中ECD蛋白的表达.结果 Hα1-216 PCR后所得708 bp片段大小符合预计结果,测序所得核苷酸序列与GenBank中人AChR α1序列完全一致.所构建的新载体经酶切鉴定目的基因正确插入,载体构建成功.随着细胞培养时间的延长ECD基因mRNA表达水平逐渐增加,且ECD蛋白表达水平也不断提高.结论 在CHO细胞成功表达了具有生物学活性的重组人nAChR α1胞外域蛋白.
重症肌无力、乙酰胆碱受体、CHO细胞、N-末端胞外域
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R392.12;R746.1
国家自然科学基金30972721
2013-03-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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