转位紧密黏附素受体细胞骨架偶联蛋白基因克隆、表达、抗体制备及应用

摘要：

目的:克隆转位紧密黏附素受体细胞骨架偶联蛋白(TccP)基因,表达纯化TccP,制备其多克隆抗体并研究该抗体在EHEC O157:H7黏附宿主细胞模型中的应用.方法:从EHEC O157:H7 Sakai菌株基因组中克隆得到tccP基因,构建重组表达质粒pET28a-TccP.将此质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)后用异丙基-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.经纯化分离后,免疫新西兰大白兔,制备其多克隆抗体,并用ELISA法和Western blot法对其进行鉴定.使用兔抗TccP多克隆抗体对EHEC O57:H7黏附宿主细胞模型中的TccP分子进行定位研究.结果:获得了TccP cDNA,与GenBank报道的序列一致,并成功构建了高效原核表达质粒pET28a-TccP;Western blot结果表明,经IPTG诱导,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达了相对分子质量(Mr)约37000的目的蛋白.表达产物N端氨基酸序列测序结果与GenBank公布的基因序列推定的氨基酸序列完全一致.所制备的兔抗TccP多克隆抗体经Westem blot法测定可与Mr37000目的蛋白发生特异性结合反应;免疫荧光检测发现TccP聚集在EHEC O157:H7 黏附处细胞膜的下方.结论:成功构建了pET28a-TccP载体,获得了高纯度的重组TccP及其特异性多克隆抗体.

关键词：肠出血性大肠杆菌O157:H7、转位紧密黏附素受体细胞骨架偶联蛋白、基因表达、多克隆抗体

所属期刊栏目：28

分类号：R378.21(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金30670107

在线出版日期：2013-02-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1282-1285