重组葡激酶-人HC蛋白融合蛋白的原核表达、纯化及鉴定

摘要：

目的:表达和纯化重组葡激酶-人HC蛋白融合蛋白,并初步鉴定其生物学活性.方法:利用重叠延伸PCR方法使基因重组获得目的基因片段,插入带有GST标签的原核高效可溶性表达载体pEGX-6P-1中,构建重组表达质粒pEGX-6P-1-SAK-HC,将重组表达质粒转化大肠杆菌B834,经IPTG诱导目的蛋白表达；对融合蛋白用谷胱甘肽琼脂糖凝胶柱(GST)亲和层析柱及DEAE离子交换柱纯化,用PreScission蛋白酶切除GST标签,SDS-PAGE分析该融合蛋白的表达量和纯度,应用纤维蛋白平板溶圈法测定评价其生物学活性.结果:构建的重组表达质粒经PCR、内切酶鉴定及基因序列测定证实,目的蛋白在大肠杆菌中获得表达,SDS-PAGE显示相对分子质量(Mr)为36000；对表达产物进行了亲和层析纯化,从上清中获得了纯度较高的葡激酶-人HC蛋白融合蛋白,体外实验显示其纤溶活性为9.4×104 IU/mg.结论:获得了可溶性的葡激酶-人HC蛋白融合蛋白,且其纤溶活性与尿激酶标准品相当.为下一步进行融合蛋白免疫原性鉴定奠定了基础.

关键词：重组葡激酶、人HC蛋白、融合蛋白、表达纯化、体外活性

所属期刊栏目：28

分类号：R541.1(心脏、血管（循环系）疾病)

资助基金：重庆市科委面上项目CSTC,2009BB5406;重庆市科委国际合作项目cstc2012gg-gjhz0025重庆市卫生局重点项目20111025

在线出版日期：2013-03-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1208-1211