人神经菌毛素-1基因shRNA慢病毒载体的构建

摘要：

目的:构建并鉴定靶向人神经菌毛素-1(NRP-1)基因的小发卡RNA的慢病毒载体.方法:针对NRP-1mRNA设计了4条shRNA,并构建pGCSIL-RFP-shNRP1慢病毒质粒,PCR扩增阳性克隆并测序鉴定.用pGCSIL-RFP-shNRP1、pHelper1.0和pHelper2.0质粒共转染293T细胞包装产生慢病毒,测定病毒滴度.将慢病毒干扰RNA及含有NRP-1过表达载体共转染293T细胞,Western blot法检测Flag表达,观察NRP-1蛋白相对表达抑制效果.结果:PCR和测序结果与设计的干扰序列一致,病毒滴度达1×109 Tu/mL.转染细胞中NRP-1蛋白相对表达显著降低.结论:成功构建了高效率的人NRP-1基因shRNA慢病毒载体.

关键词：Neuropilin-1、RNA干扰、重组载体

所属期刊栏目：28

分类号：R392-33;R735.7

资助基金：国家自然科学基金30971340,81101874;陕西省科学技术研究发展计划2011-K12-19

在线出版日期：2013-03-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1200-1203