NY-ESO-1/GST融合蛋白在大肠杆菌的表达、纯化及鉴定
目的:构建肿瘤-睾丸抗原NY-ESO-1与GST融合基因的原核表达载体,在大肠杆菌中表达并对融合蛋白NY-ESO-1/GST进行纯化和初步鉴定.方法:设计针对NY-ESO-1的特异性引物,采用聚合酶链反应(PCR)从睾丸组织的cDNA文库扩增NY-ESO-1基因片段,经上下游引物所引入的EcoR I和Xho I双酶切后克隆人原核表达载体pGEX-4T1中GST标签的下游,构建重组表达载体pGEX-4T1-NY-ESO-1,并将该载体转化大肠杆菌BL21( DE3) pLysS中,IPTG诱导表达NYESO-1/GST融合蛋白,经不同浓度尿素洗脱纯化后,表达产物通过SDS-PAGE和Western blot法进行鉴定.结果:重组质粒经限制性内切酶EcoR I和Xho I双酶切鉴定和IPTG诱导表达NY-ESO-1/GST的SDS-PAGE分析表明,表达产物的相对分子质量(Mr)为44000,与理论值相符,并主要以包涵体形式存在,灰度扫描分析显示融合蛋白表达量占菌体蛋白总量的90％,Western blot结果证实该NY-ESO-1/GST可与抗GST单克隆抗体( mAb)发生特异性结合反应,提示为融合蛋白.结论:成功构建了NY-ESO-1基因原核表达载体pGEX- 4T1 -NY-ESO-1,利用大肠杆菌表达系统,获得了较高纯度的包涵体形式NY-ESO-1/GST融合蛋白.
NY-ESO-1、GST、融合蛋白、原核表达、纯化
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R392.11
国家自然科学基金面上项目81171977;30872371;国家高技术研究发展计划863重大项目2006AA02A237
2012-12-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
1094-1097
