抗人CD80单链抗体对不同肿瘤细胞膜型CD80分子的识别与体外增殖的影响
目的:制备真核细胞CHO表达的CD80单链抗体(CD80-scFv)并研究其对不同肿瘤细胞膜型分子的识别及增殖的影响.方法:将表达CD80-scFv的CHO细胞大规模无血清培养收集上清,采用IMAC亲和层析法纯化获取抗人抗体.采用免疫荧光及流式细胞术分析其对人恶性B系淋巴瘤细胞株Daudi、人黑色素瘤细胞株A375、神经胶质瘤细胞株U251及人多发性骨髓瘤细胞株8266及U266细胞膜型CD80分子的识别.在上述肿瘤细胞的培养体系中加入不同浓度的CD80-scFv,MTT法分析其对肿瘤细胞增殖的影响.以天然高表达CD80分子的8266细胞经丝裂霉素处理后作为APC,人PBMC作为效应细胞,分析抗体通过阻断共刺激信号对PBMC增殖的影响.结果:从CHO细胞培养上清中获取的抗人CD80-scFv纯化品的量为6.67 mg/L；该抗体与Daudi、U251、A375、8266及U266的阳性结合率分别为96.8％、39.6％、20.5％、99.9％及3.8％.抗体对高表达CD80分子的Daudi及8266细胞具有增殖抑制作用,加入抗体(终浓度为25 μg/mL)培养72 h时的抑制率分别为24.04％及24.16％.同时,抗体通过阻断CD80-CD28介导的共刺激信号,抑制PBMC的增殖.结论:CD80-scFv能够特异识别细胞膜型CD80分子,并对高表达细胞的体外增殖具有抑制作用.
CD80、单链抗体、CHO、增殖、阻断
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R392.1
国家科技重大专项2009ZX09103-705;苏州市科技计划项目SYS201104
2012-12-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
1081-1083,1087
