Plk1 330/597位丝氨酸磷酸化突变体对胞质分裂的影响
目的:研究Plk的330/597位丝氨酸的模拟磷酸化突变体Plk1 S330/597D和不能磷酸化突变体Plk1 S330/597A的绿色荧光融合蛋白在HeLa细胞中的定位以及对有丝分裂的影响.方法:将野生型Plk1-GFP质粒、模拟磷酸化型突变体Plk1 S330/597D-GFP质粒和不能磷酸化突变体Plk1 S330/597A-GFP质粒分别转染HeLa细胞株,免疫荧光法检测突变体融合蛋白Plk1 S330/597D-GFP和Plk1 S330/597A-GFP的细胞定位的定位,Western blot法检测上述突变体融合蛋白的表达.通过有丝分裂期的细胞计数,流式细胞仪检测细胞周期,观察转染突变体后HeLa细胞的有丝分裂进程.结果:模拟磷酸化突变体Plk1 S330/597D和不能磷酸化突变体Plk1 S330/597A的融合蛋白能正确表达.突变体在细胞有丝分裂过程中均能正确定位于动点和中体,但不能磷酸化突变体Plk1 S330/597A融合蛋白对HeLa细胞的有丝分裂有明显的抑制作用,使胞质分裂期的细胞数量较对照组明显增多,产生G2/M期阻滞(P＜0.01),并造成染色体分离滞后的现象.结论:Plk1激酶自身的磷酸化状态对其有丝分裂期功能具有重要作用,其330和597位丝氨酸去磷酸化能抑制细胞的有丝分裂,使细胞周期发生G2/M期阻滞.
Plk1激酶、磷酸化、突变体、有丝分裂、肿瘤发生、HeLa细胞
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R392-33;R392.12
国家自然科学基金30801329;教育部霍英东教育基金会高等院校青年教师基金131033;安徽省优秀青年基金10040606Y19
2012-12-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
1016-1019
