ATF-2基因RNA干扰表达载体的构建及鉴定
目的:构建活化转录因子2( ATF-2)基因RNA干扰的真核表达载体,观察其对HepG2肝癌细胞株增殖及凋亡的影响.方法:根据ATF-2 mRNA序列,合成两条寡聚DNA片段,退火后克隆人质粒载体PBA-siU6,DNA测序鉴定重组质粒PBA-siATF-2.脂质体介导质粒转染HepG2细胞.Western blot法检测ATF-2蛋白表达;MTT方法检测细胞增殖率,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率.结果:ATF-2基因RNA干扰载体经测序分析证实插入64 bp序列正确无误;Western blot法显示干扰组细胞内ATF-2蛋白表达量明显降低;ATF-2基因的下调导致HepG2细胞增殖阻滞和凋亡发生.结论:成功构建了ATF-2基因RNAi真核表达载体,下调HepG2细胞ATF-2基因表达,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡.
ATF-2基因、RNA干扰、表达载体
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R392.12
2012-12-05(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
985-987