Mucin16蛋白的表达纯化及单克隆抗体的制备与鉴定

摘要：

目的:在原核生物中表达带有His标签的mucin 16N端重组蛋白(简称为His-mucin 16N),制备抗mucin 16的单克隆抗体(mAb).方法:将mucin 16基因片段插入原核表达载体pET-32,在大肠杆菌中表达重组蛋白,用亲和纯化方法纯化后免疫BALB/c小鼠,并进行细胞融合.筛选可稳定分泌抗mucin 16抗体的阳性单克隆杂交瘤细胞株,用Western blot、ELISA、免疫荧光和免疫组化等方法分析和鉴定抗mucin 16的mAb.结果:表达并纯化了His-mucin 16N蛋白；筛选出几株可稳定分泌特异性抗人mucin 16 mAb的细胞株；挑选出效价高、特异性好的1株进行纯化.获得的抗mucin 16 mAb,可用于Western blot、ELISA、免疫组化、免疫荧光等检测,并鉴定该抗体亚型为IgG1.通过上述免疫学实验,分析了在不同肿瘤细胞中mucin 16的表达情况.结论:在原核生物中成功表达和纯化带His标签的mucin 16N重组蛋白,制备出具有高特异性的抗mucin16的mAb.

关键词：mucin 16、CA125、蛋白纯化、单克隆抗体、杂交瘤

所属期刊栏目：28

分类号：R392.11;Q813.2

资助基金：福建省科技重点项目2011Y0050;厦门市科技计划创新项目3502Z20123009

在线出版日期：2012-12-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：960-963,971