CD326分子胞外区表皮生长因子样结构域融合蛋白的表达与纯化
目的:构建含有CD326分子胞膜外区EGF-like 1、EGF-like 2以及EGF-like1+2结构域的真核表达载体,在COS7细胞中表达相应蛋白并纯化.方法:用PCR扩增编码EGF-like 1、EGF-like 2以及EGF-like 1+2结构域的cDNA,插入真核表达载体pSecTag2B,脂质体法转染COS-7细胞,利用重组蛋白C端的组氨酸标签(6×His-tag)进行金属螯合亲和层析纯化,最后用SDS-PAGE和Western blot法检测纯化的包含EGF-like 1、EGF-like 2以及EGF-like 1+2结构域融合蛋白的纯度.结果:序列测定的结果显示含有CD326分子胞膜外区EGF-like 1、EGF-like 2以及EGF-like 1+2结构域序列的载体构建正确.经Ni2+-NTA树脂柱亲和层析纯化得到3种融合蛋白,相对分子质量(Mr)分别约为3 600,7 700和12 000.纯度均约为95％.Western blot检测结果显示3种融合蛋白都具有下游的c-myc表位.结论:成功构建了含有CD326分子胞外区EGF-like 1、EGF-like 2以及EGF-like 1+2 结构域的真核表达载体,并在COS-7细胞中表达.为制备抗CD326分子不同结构域的单克隆抗体提供了免疫原.
CD326、表皮生长因子样结构域、载体构建、真核表达
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R391.12;R392-33
西北大学国家级大学生创新实验20101069713
2012-12-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
923-925
