人BRDT-NY多克隆抗体的制备及其在消化道肿瘤中的表达检测

摘要：

[目的]构建人BRDT-NY原核表达载体,表达人BRDT-NY原核蛋白,制备其多克隆抗体,检测其在消化道肿瘤中的表达.[方法]以质粒pTriplEx2-BRDT-NY为模板,用PCR法扩增人的BRDT-NY基因.将其克隆到原核表达质粒pET28a+中,构建重组质粒pET28a +-BRDT-NY.将该重组质粒转化BL21菌,以IPTG诱导原核蛋白的表达.应用纯化的原核蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体,ELISA测定滴度,并用免疫组织化学法分析该蛋白在消化道肿瘤组织中的表达.[结果]成功构建了用于原核蛋白表达的重组质粒,在BL21菌中表达BRDT-NY重组蛋白,用亲和层析Ni柱进行纯化得到人BRDT-NY蛋白.用纯化的BRDT-NY蛋白免疫小鼠2个月后,得到相应的多克隆血清抗体,经ELISA检测,滴度均能达到1/10万.免疫组织化学染色显示BRDT-NY蛋白在消化道肿瘤中有较高的表达率.[结论]该抗体的制备为进一步研究BRDT-NY在消化道肿瘤中的发病机制奠定了基础.

关键词：人BRDT-NY、多克隆抗体、消化道肿瘤

所属期刊栏目：28

分类号：R392.11;Q786

资助基金：国家自然科学基金31071020;江苏省自然科学基金BK2009192;扬州大学"新世纪人才工程"优秀青年骨干教师计划2010年

在线出版日期：2012-10-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：847-850